新手上路,请教各位师兄师姐一些问题:
1.关于冰冻切片组织固定与否的困惑:
冰冻切片是否需要前固定或者后固定?
(1)一块组织想做冰冻切片的话,这个组织需要事先用4%的PFA进行固定吗?如果需要的话应该固定多久?
(2)如果组织事先没有进行前固定,那么做完冰冻切片以后,组织切片还需要进行4%PFA的固定吗?如果需要的话,需要固定多久?
(3)如果需要固定,那么做免疫荧光的时候需要进行抗原修复吗?
2.冰冻切片的组织如何保存?
(1)做好的冰冻切片,如果无法当天及时进行免疫荧光的染色,那么切片应该保存在多少摄氏度? 4、-20、-80?
(2)如果取材的新鲜组织无法当天做冰冻切片,那么取材的组织应该进行怎么样的保存处理?我看网上大部分是OCT包埋以后进行液氮速冻,速冻以后放入-80℃进行保存,但是也有人说不需要OCT包埋处理,直接扔到-80度冰箱。
3.冰冻切片做免疫荧光前为什么需要烘干?
烘干的目的是什么?烘干是为了防止脱片吗?
4.关于冰冻组织切片在免疫荧光过程中组织发生部分脱落的问题
冰冻切片在免疫荧光的操作过程中,肉眼可见的组织切片发生了一部分的脱落和破碎,好好的组织中间出现了空洞,请问是什么原因呢?应该怎么做才能避免这种情况的发生呢?
谢谢回答!!!