Kinetické stanovení antiradikálové aktivity

Pro posouzeni antioxidacni aktivity se casto použivaji jednoduche spektrofotometricke testy. K nejvice použivaným testům patři zhaseni stabilniho radikalu 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazylu (DPPH). Antiradikalový ucinek se zpravidla vyjadřuje v hodnotach EC50, tedy jako koncentrace antioxidantu, ktera za zvolenou dobu zhasi 50 % radikalů DPPH1. Cilem prace bylo vypracovani kineticke metody stanoveni antiradikalove aktivity na zakladě urceni rychlostnich konstant reakce. Výchozi podminky reakce jsme volili tak, že jeden ze substratů byl přitomen v mnohem vyssi koncentraci než druhý substrat. Narozdil od stanoveni při nadbytku antioxidantu, stanoveni při nadbytku DPPH umožňovalo urceni rychlostni konstanty reakce a poctu radikalů DPPH zhasených 1 molekulou antioxidantu. Touto metodou jsme stanovili antiradikalovou aktivitu 24 antioxidantů, převažně fenolických kyselin. Misto ocekavaneho druheho řadu se reakce vždy překvapivě řidila kinetikou prvniho řadu. Nejrychleji reagovala s DPPH kyselina askorbova, ktera zhasela radikal DPPH přibližně milionkrat rychleji než nejslabsi kyselina parahydroxybenzoova. Antiradikalova aktivita zavisela, spise než na poctu fenolických hydroxylů, na reaktivitě nejvice aktivovaneho fenolickeho hydroxylu. Silnějsi antiradikalový ucinek měly antioxidanty, jejichž struktura umožňuje vyssi stabilizaci vznikleho fenolickeho radikalu přitomnosti dvojne vazby v postrannim řetězci antioxidantu nebo přitomnosti hydroxylove nebo methoxylove skupiny na sousednich uhlicich. Vypocitanou rychlostni konstantu lze, narozdil od dřive použivaných způsobů vyhodnoceni, použit k přesnemu a jednoduchemu vyjadřeni antiradikalove aktivity.