Construction of SSH Library and Its Analyses of Cotton Drought Associated Genes under Drought Stress

摘要： 以耐旱自交系邯郸177为材料，利用抑制性差减杂交技术(SSH)，构建棉花苗期叶片的正向差减文库。挑取300个阳性克隆进行PCR验证，并对验证后的单克隆进行测序和分析，共获得284个有效序列。聚类后得到202条uniESTs序列，其中174条singlets，28条contigs。经过BlastN分析，156个unigene可以在GenBank中找到同源序列，46个unigene未能找到同源匹配。经BlastX分析，40个unigene与未知功能蛋白或假定蛋白有较高相似性，116条unigene与已知功能蛋白有较高同源性。用KOBAS系统将33个unigene定位到55个Pathways中，其中P值小于0.5的Pathway有23条。初步分析发现, 丙酮酸盐代谢(pyruvate metabolism)途径、乙醛酸和二羧酸代谢(glyoxylate and dicarboxylate metabolism)途径与棉花抗旱相关性较大。这些unigene基因涉及信号传导、能量代谢、蛋白质代谢、核酸代谢、光合作用及膜运输等代谢过程。发现了苹果酸合成酶基因(Ms1, 001_B03; Ms2, 003_E04)、苹果酸脱氢酶基因(Md1, 001_C12; Md2, 002_F01)；NAC(001_C08)、锌指蛋白(zfp, 003_C06)、BZR1/BES1(003_G04)等转录调节因子，以及翻译控制肿瘤蛋白基因(TCTP，002_C04)等耐旱相关基因。